Purification and Properties of Phosphoenolpyruvate Carboxykinase from C4 Plants

Resumo

A fosfoenolpiruvato (PEP) carboxiquinase (EC 4.1.1.49) das folhas de Urochloa panicoides, Chloris gayana e Panicum maximum foi purificada até a homogeneidade e suas propriedades foram determinadas. A enzima de todas as três plantas do tipo C4 com PEP carboxiquinase tem propriedades físicas e cinéticas semelhantes. A enzima nativa tem um peso molecular de 380.000 e seu peso molecular monomérico é de cerca de 64.000, sugerindo que a enzima é hexamérica. Ela é ativa em uma ampla faixa de pH e tem um pH ótimo entre 7,4 e 8,2, possui uma ampla especificidade de nucleotídeos, tem uma necessidade absoluta de Mn2+ e é estimulada por C-. A enzima é inibida por ácido 3-fosfoglicérico, frutose 6-fosfato e frutose 1,6-bisfosfato; o mecanismo de inibição é discutido. A PEP carboxiquinase purificada é incapaz de catalisar a conversão de oxaloacetato em piruvato, nem possui atividade de piruvato quinase. Esses achados são discutidos em relação à via fotossintética C4 operando em plantas do tipo C4 com PEP carboxiquinase

Abstract

Phosphoenolpyruvate (PEP) carboxykinase (EC 4.1.1.49) from the leaves of Urochloa panicoides, Chloris gayana and Panicum maximum has been purified to homogeneity and its properties determined. The enzyme from all three PEP carboxykinase-type C4 plants have similar physical and kinetic properties. The native enzyme has a molecular weight of 380 000 and its monomeric molecular weight is about 64 000, suggesting the enzyme is hexameric. It is active over a wide pH range and has a pH optimum between 7.4 and 8.2, has a wide nucleotide specificity, has an absolute requirement for Mn2+ and is stimulated by C-. The enzyme is inhibited by 3-phosphoglyceric acid, fructose 6-phosphate and fructose 1,6-bisphosphate; the mechanism of inhibition is discussed. The purified PEP carboxykinase is unable to catalyse the conversion of oxaloacetate to pyruvate, nor does it possess pyruvate kinase activity. These findings are discussed in relation to the C4 photosynthetic pathway operating in PEP carboxykinase-type C4 plants.